ÖZET VE AÇIKLAMA TEST
Sıtma, yılda 200 milyondan fazla insanı enfekte eden ve 1 milyondan fazla insanı öldüren sivrisinek kaynaklı, hemolitik, ateşli bir hastalıktır.Dört Plasmodium türü neden olur: P. falciparum, P. vivax, P. ovale ve P. malariae.Bu plazmodilerin tümü insan eritrositlerini enfekte eder ve yok ederek titreme, ateş, anemi ve splenomegali üretir.P. falciparum, diğer plazmodiyal türlerden daha şiddetli hastalığa neden olur ve çoğu sıtmadan ölümden sorumludur.P. falciparum ve P. vivax en yaygın patojenlerdir, ancak tür dağılımında önemli coğrafi farklılıklar vardır.
Geleneksel olarak sıtma, organizmaların Giemsa ile boyanmış kalın periferik kan yaymalarında gösterilmesiyle teşhis edilir ve farklı plazmodyum türleri, enfekte eritrositlerdeki görünümleriyle ayırt edilir1.Teknik, doğru ve güvenilir tanı koyma yeteneğine sahiptir, ancak yalnızca, dünyanın uzak ve yoksul bölgeleri için büyük engeller oluşturan, tanımlanmış protokoller2 kullanan yetenekli mikroskopistler tarafından gerçekleştirildiğinde.
Malaria Pf/Pan Antijen Hızlı Test Kiti bu engelleri çözmek için geliştirilmiştir.Test, P. falciparum'a özgü proteine, Histidin Tekrar Protein II'ye (pHRP-II) yönelik bir çift monoklonal ve poliklonal antikor ve plazmodyumun dört türü tarafından üretilen bir protein olan plazmodyum Laktat Dehidrogenaz'a (pLDH) yönelik bir çift monoklonal antikor kullanır ve böylece P. falciparum ve/veya diğer üç plazmodiadan herhangi biriyle enfeksiyonun eş zamanlı olarak saptanmasına ve ayırt edilmesine olanak tanır.Eğitimsiz veya asgari vasıflı personel tarafından laboratuvar ekipmanı olmadan gerçekleştirilebilir.
PRENSİP
Pf/ Pan Sıtma Hızlı Test kiti, yanal akış kromatografik bir immünolojik testtir.Test şeridi bileşenleri şunlardan oluşur: 1) kolloid altınla konjuge fare anti-pHRP-II antikoru (pHRP II-altın konjugatları) ve kolloid altınla konjuge fare anti-pLDH antikoru (pLDH-altın konjugatları) içeren bordo renkli konjugat pedi,
2) iki test bandı (Pan ve Pv bantları) ve bir kontrol bandı (C bandı) içeren bir nitroselüloz membran şeridi.Pan bandı, dört plazmodia türünden herhangi biriyle enfeksiyonun tespit edilebildiği monoklonal anti-pLDH antikoru ile önceden kaplanmıştır, Pf bandı, Pf enfeksiyonunun saptanması için poliklonal anti-pHRP-II antikorları ile önceden kaplanmıştır ve C bandı keçi anti-fare IgG ile kaplanmıştır.
Test sırasında, test kasetinin numune kuyucuğuna (S) yeterli miktarda kan numunesi dağıtılır, tampon kuyusuna (B) bir lizis tamponu eklenir.Tampon, kırmızı kan hücrelerini parçalayan ve kasette tutulan şerit boyunca kılcal hareketle göç eden çeşitli plazmodyum antijenlerini serbest bırakan bir deterjan içerir.Örnekte mevcutsa pHRP-II, pHRP II-altın konjugatlarına bağlanacaktır.İmmünokompleks daha sonra önceden kaplanmış anti-pHRPII antikorları tarafından zar üzerinde yakalanarak bordo renkli bir Pf bandı oluşturarak Pf pozitif test sonucunu gösterir.Numunede mevcutsa pLDH, pLDH altın konjugatlarına bağlanacaktır.İmmünokompleks daha sonra önceden kaplanmış anti pLDH antikoru tarafından zar üzerinde yakalanarak bordo renkli bir Pan bandı oluşturarak plazmodyum pozitif test sonucunu gösterir.Pan bandının yokluğunda, diğer üç plazmodiden herhangi biri için pozitif bir test sonucu önerilebilir.
Herhangi bir test bandının (Pan ve Pf) olmaması, negatif bir sonuç olduğunu gösterir.Test, test bantlarının herhangi birindeki renk gelişimine bakılmaksızın keçi anti-fare IgG / fare IgG'nin (pHRP-II ve pLDH-altın konjugatları) immünokompleksinin bordo renkli bir bandını sergilemesi gereken bir dahili kontrol (C bandı) içerir.Aksi halde test sonucu geçersiz olur ve numunenin başka bir cihazla tekrar test edilmesi gerekir.
